GLUTATYON S-TRANSFERAZ ENZİMİNİN TAVUK TAŞLIĞINDAN SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU

Özet

Bu eser, glutatyon S-transferaz (GST) enziminin tavuk taşlığından saflaştırılması ve karakterizasyonu üzerine yapılmış kapsamlı bir çalışmayı içermektedir. GST, indirgenmiş glutatyonun ksenobiyotiklere bağlanarak detoksifikasyonunu sağlayan önemli bir enzimdir. Tavuk taşlığı dokusundan elde edilen GST enzimi, amonyum sülfat çöktürmesi ve glutatyon agaroz afinite kromatografisi yöntemleri kullanılarak %85,42 verim ile 1441 kat saflaştırılmıştır. Enzimin molekül ağırlığı yaklaşık 25,66 kDa olarak tespit edilmiştir. Karakterizasyon çalışmaları kapsamında optimum pH değeri 7,5, optimum iyonik şiddet 0,3 mM ve optimum sıcaklık 40 °C olarak belirlenmiştir. Enzimin stabil pH aralığı geniş olup, çözeltide 60 saat boyunca stabil aktivite göstermiştir. Kinetik parametreler doğrultusunda, CDNB ve GSH substratları için KM değerlerinin sırasıyla 11,476 mM ve 11,134 mM, Vmax değerlerinin ise 0,5837 EÜ/mL ve 0,75205 EÜ/mL olduğu saptanmıştır. Bu değerler GST enziminin GSH substratına daha yüksek afiniteye sahip olduğunu göstermektedir. Elde edilen sonuçlar, GST enzimlerinin farklı organizmalardaki yapısal ve fonksiyonel benzerliklerini doğrulamakta ve detoksifikasyondaki önemini vurgulamaktadır. Çalışma, hem bilimsel araştırmalarda hem de biyoteknolojik uygulamalarda GST'nin anlaşılması ve kullanılmasına katkı sağlamaktadır.